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采血卡廠家詮釋從血液樣本中提取DNA
關(guān)于DNA如何從血液中提取，下面由采血卡廠家為大家詮釋如何從血液樣本中提取DNA。首先通過使用低滲緩沖液（碳酸氫銨和氯化銨; Himedia）裂解紅細(xì)胞（RBC）來分離來自全血的淋巴細(xì)胞，對淋巴細(xì)胞具有最小的裂解作用。將三體積的RBC裂解緩沖液加入血液樣品中并通過渦旋混合并徹底倒置5分鐘并以20,00g離心（Eppendorf 5415R）10分鐘。大部分上清液丟棄，留下約1ml以防止細(xì)胞損失。向沉淀中加入3體積RBC裂解緩沖液，并將渦旋，翻轉(zhuǎn)和離心步驟重復(fù)2-3次，直至獲得澄清的上清液和干凈的白色沉淀。 最后一次洗滌后，將上清液完全棄去，將沉淀重懸于500μlPBS中，然后加入400μl細(xì)胞裂解緩沖液（10mM Tris-HCl，10mM EDTA，50mM NaCl，10％SDS，pH 7.5）和10μl蛋白酶K（10mg / ml原液; Himedia）。將樣品渦旋以完全溶解沉淀，并在56℃下在水?。?/span>CW-30G; Jeio Tech）中孵育2小時以進(jìn)行裂解。隨后將等體積的苯酚（用Tris平衡，pH8）加入管中并通過倒置1分鐘充分混合。將管在10,000g （4℃）下離心10分鐘，將含水上層轉(zhuǎn)移到含有等體積（1：1）苯酚和氯仿：異戊醇（24：1）的新管中。通過倒置將管混合1分鐘并以10,000g （在4℃下）離心10分鐘。 然后將上清液轉(zhuǎn)移到新管中，加入10μl10mg/ ml RNase A（Fermentas，Thermo Scientific）。
將樣品在37℃下孵育30分鐘，然后加入等體積的氯仿：異戊醇（24：1）并通過將管倒置1分鐘并在10,000g （4℃）下離心10分鐘進(jìn)行混合。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中，加入兩倍體積的無水乙醇（Merck）并輕輕倒轉(zhuǎn)幾次并在-20℃下冷卻，然后在10,000g （4℃）下離心20分鐘。棄去上清液，加入250μl70％乙醇，輕輕敲打沉淀，然后以10,000rpm離心10分鐘并輕輕倒出上液。顆粒在層流氣流中風(fēng)干，將干燥的沉淀重懸于50μl無核酸酶的水或1×TE緩沖液中，并在-20℃或-80℃冷凍儲存。
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