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一、聚苯乙烯細胞培養(yǎng)皿(塑料培養(yǎng)皿)是生命科學實驗室中最基本的工具。因此體外的玻璃形式由Petri于1887年引入。除疏水性塑料的幾何改性和親水轉(zhuǎn)化外,聚苯乙烯塑料培養(yǎng)皿在130年內(nèi)基本保持不變。今天,聚苯乙烯培養(yǎng)皿在藥理學和生物材料測試(細胞培養(yǎng),動物模型,臨床試驗)的開始,它用于詢問細胞,但也用于人類生命的開始,即體外受精。以前的實驗工作挑戰(zhàn)了聚苯乙烯培養(yǎng)皿的生物耐受性:Sommer等。表明當與水性介質(zhì)接觸時,聚苯乙烯變軟,促進納米級堿性層的形成的效果與包埋的ROS一起對細胞具有不利影響。
二、在干燥之前,應該沒有來自緩動劑的內(nèi)臟的食物。在干燥前一天執(zhí)行這些步驟。
1.將~2 mL泉水倒入新的35 mm塑料培養(yǎng)皿中。
2.將緩釋劑轉(zhuǎn)移到含有泉水的新菜中,將其從食物中分離出來。通過在室溫下將它們留在盤子中過夜來使心臟病死亡。
3.將含有~5 mL 10%甘油溶液(1份甘油,9份泉水)的玻璃表盤放入帶蓋的小塑料盒中。
4.將盒子在室溫下放置過夜(約16小時)。
5.使用濕度計檢查腔室內(nèi)的濕度。約16小時后相對濕度應> 90%。準備瓊脂涂層培養(yǎng)皿蓋在使用當天準備瓊脂涂層的蓋子。不要存放或重復使用涂層蓋子。
6.用瓶裝泉水準備2%瓊脂溶液,煮沸。
7.將 300μL沸騰瓊脂溶液移液到35mm培養(yǎng)皿的蓋子中。丟棄盤子本身; 只使用蓋子。
8.快速工作,使用移液器的尖端將瓊脂溶液均勻地分布在整個蓋子周圍。盡量減少過量的瓊脂和不均勻的分布。
9.將蓋子側(cè)面傾斜,使多余的瓊脂匯集到一側(cè)。用移液管從蓋子側(cè)面取出并丟棄多余的瓊脂。
10.讓薄瓊脂涂層固化并干燥5-10分鐘。
11.使用微量移液管將步驟2中的饑餓的緩動劑轉(zhuǎn)移到步驟10的瓊脂涂覆的皿蓋上。盡量減少隨著緩步移植的水量。
12.使用微量移液管從盤蓋上除去多余的水。
13.將含有緩動劑的瓊脂涂層蓋子放入步驟5的加濕室中,并孵育過夜(約16小時)。
14.從加濕室中取下蓋子,用解剖顯微鏡檢查干燥的樣品。標本應該采用圓形的墩狀外觀。
15.將緩動劑保持在環(huán)境濕度(~40%相對濕度)下24小時,然后在室溫下將其覆蓋在干燥器中。
16.將 2 mL瓶裝泉水移入培養(yǎng)皿蓋。
當在解剖顯微鏡下觀察時,已經(jīng)干燥儲存24小時的緩動劑在10分鐘內(nèi)開始退出其屯狀態(tài)。通常在30-60分鐘內(nèi)觀察到協(xié)調(diào)運動。生存率通常為~80%,并通過對協(xié)調(diào)運動和對刺激的反應(用微量移液管尖端接觸)進行評分來判斷。